近日，国际学术期刊Vaccine在线发表了中国科学院巴斯德研究所分子病毒课题组的研究论文“A Vero-cell-adapted vaccine donor strain of influenza A virus generated by serial passages” Virus Vero cell -适应疫苗株”）。
流感病毒一直危害着人类健康，其中甲型流感病毒变异快、宿主范围广、亚型和毒株众多，极易引起感染。 目前，预防流感最有效的方法是接种流感疫苗。 自1940年代以来，通过接种鸡胚来扩增流感疫苗毒株已成为生产流感疫苗的常用方法。 过敏、限量生产等缺陷越来越明显。 因此，开发易于放大、无过敏反应、能更好地保持抗原性的哺乳动物细胞培养体系成为新一代流感疫苗生产的热门培养基。 非洲绿猿肾细胞系（Vero）、犬肾细胞系（MDCK）和胚胎视网膜细胞系（PER.C6）均被选为人流感疫苗的生产培养基上海流感疫苗，其中Vero细胞系已成功用于人流感疫苗狂犬病、脊髓灰质炎和其他疫苗的生产已完全通过安全认证。 然而，目前常见的流感病毒疫苗主干株PR8病毒在Vero细胞上的生长非常有限，导致Vero细胞流感疫苗的生产受到限制。 如何提高PR8疫苗株在Vero细胞上的产量和效率，是将Vero细胞开发成流感疫苗二倍体细胞生产培养基的关键技术。
在孙兵研究员的指导下，上海巴斯德研究所徐科副研究员和胡伟斌博士、张宏博士共同参与了该项目。 学生，通过在 Vero 细胞上连续传代 20 次 PR8 病毒，获得了 Vero 细胞适应株 PR8-p20。 通过病毒全基因组测序和反向遗传学构建重组病毒上海流感疫苗，最终确定病毒内部基因NP、PB1、PA和NS1的四个氨基酸突变决定了PR8病毒对Vero细胞的适应性，将含有PR8病毒具有这四个突变位点的基因被命名为PR8-4mut。 病毒生长曲线结果显示，PR8-4mut病毒比现有PR8疫苗株生长速度更快，接种后48小时可达到最高病毒滴度，比PR8病毒滴度高1000倍。 因此，以PR8-4mut为疫苗骨架株构建的禽流感（H5N1、H7N1、H9N2）和人流感（H1N1、H3N2）疫苗株在Vero细胞上的产量可得到大幅度提高，Vero细胞适应研究中获得的菌株 PR8-4mut 在小鼠和鸡胚胎中的致病性与 PR8 相当，并保持胰蛋白酶依赖性。 研究结果表明，PR8-4mut是一种甲型流感疫苗Vero细胞骨架株，能够包装流感病毒HA和NA的多种亚型，并保持分离株原有的抗原性。
该研究得到国家自然科学基金、国家“863”计划、赛诺菲-安万特-上海生命科学研究院青年人才等项目的支持。
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四个突变位点可加速病毒聚合酶入核，可作为疫苗骨架株，促进Vero细胞生产甲型流感疫苗
