高压蒸汽灭菌器的灭菌效果验证一般有化学指示剂法、点温计法、自制测温管法和生物指示剂法。 每种方法的原理都差不多，主要是通过验证灭菌器内的温度是否达到要求。 我们可以根据自己实验室的具体情况，选择一种或多种方法进行验证。
1、化学指示剂法
原理：化学指示剂在一定温度和作用时间下加热会变色或变形。 根据这一特性，可以判断是否达到了要求的灭菌参数。
一般实验室常用灭菌指示带。 这种指示胶带是通过灭菌前后胶带的颜色变化来判断灭菌效果的。 它由热敏化学物质、显色剂和颜料辅料制成，将油墨以条纹状印刷在特制的胶带上。 指示胶带可直接粘贴在包装外面，长度不少于5cm，轻轻压一下胶带，以增加附着力和密封效果； 121°C 20分钟或130°C 4分钟后，印在胶带上的对角白色指示线将完全变黑，成为黑线； 如果变色不均匀或不完整，则可认为包装不符合灭菌条件。
二、留点温度计法
原理：留体温计的方法是利用水银体温计不回流的特点。 它的原理类似于传统的温度计，可以指示灭菌器在灭菌过程中达到的最高温度。
校验时，将水银温度计放入盛满水的大三角瓶中。 灭菌时，将三角瓶分别放在灭菌器的上下两部分。 灭菌后，检查水银温度计的温度是否与要求的温度一致。 该方法只能验证温度，不能说明灭菌时间是否符合要求，因此是灭菌器验证的最低标准。
3、自制测温管法
原理：利用一些化学物质加热熔化再冷却，结晶的形状各不相同。 将化学品密封在小玻璃管中，灭菌时放入灭菌器中，灭菌后观察晶体的形状，可以判断温度是否达标。
常用的试剂是苯甲酸。 苯甲酸的熔点为121-123℃，与我们要求的灭菌器灭菌温度基本一致。 因此，灭菌时，将固体苯甲酸密封在小玻璃管中，放入灭菌器内。 灭菌结束后，可观察苯甲酸的状态，以验证灭菌器是否达到要求的温度。 该方法的局限性与左点温度计法相同，只能指示灭菌时的温度，无法判断灭菌时间是否符合要求。
4、生物指示法
原理：以非致病性嗜热脂肪芽孢杆菌孢子为指示菌，测定热力灭菌效果。 嗜热脂肪芽孢杆菌的孢子具有很强的耐热性，其耐热性与病原微生物肉毒梭菌相似。 以此作为指示菌，验证灭菌器是否满足灭菌要求。
生物指示剂有孢子悬液、孢子片、菌片和培养基混合指示管三种。 一般放置在灭菌容器的5个点：下层的前、中、后和上、中层的中心点。灭菌后，取指示剂接种到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中
培养基，55-60℃培养2-7天，如果培养基清亮，颜色不变留点温度计，说明孢子被杀灭，灭菌器灭菌效果好； 如果培养基呈黄色浑浊，说明孢子没有被杀灭留点温度计，灭菌器灭菌效果不达标。 孢子悬浮液和孢子片的验证方法也是如此。
目前，实验室普遍使用商品化的生物指示管。 原理同孢子悬液和孢子片。 指示管内有嗜热脂肪芽孢杆菌孢子和一小玻璃管培养液。 各点高压灭菌后，将装有培养液的玻璃管压碎，将培养液从小管内放出，置于56℃培养箱中培养，同时做阳性对照。 如果灭菌器灭菌效果不合格，孢子在指示管中生长，复活后肉汤会变色，肉汤会变黄； 如果灭菌器的灭菌效果好，管内的孢子就会失活，不再生长，肉汤还是原来的紫色。
对于灭菌器效果的验证，目前尚无相关标准对验证频率有严格要求，但实验室应制定自己的验证频率规定并严格按照要求执行。 从可操作性和验证结论两方面来说，小编推荐使用指示胶带和生物指示管，因为这两种方法操作简单，可以充分验证灭菌效果。
