清洁、消毒、灭菌是微生物实验室污染防治的重要环节。 包括实验室内外环境的清洁和消毒； 检测工具和培养基的消毒灭菌。
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概念
(1)消毒，是指杀灭或去除传播介质上的病原微生物，使其无害化的处理。 根据是否有已知传染源，可分为预防性消毒和疫源性消毒； 按消毒时间可分为随机消毒和终末消毒。
(2)灭菌是指杀死或去除传输介质上的所有微生物(包括孢子)，使其无菌。 灭菌后的物品称为“灭菌物品”。
消毒和灭菌是两种不同的方法。 灭菌可以包括消毒，但消毒不能代替灭菌。 消毒通常用于实验室检测环境、人员手等，灭菌通常用于检测设备、检测试剂等。
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消毒灭菌原理
（一）明确主要消毒对象要具体分析造成污染的途径、涉及的介质和病原微生物的种类，有针对性地使用消毒剂。
(2)采用合适的消毒方法根据消毒对象，选择简单、有效、不损坏物品、来源丰富、价格适中的消毒方法。
(3)影响消毒效果的控制因素 很多因素都会影响消毒剂的效果，而各种消毒剂对这些因素的敏感性差别很大。
一、微生物的种类
不同种类的病原微生物对消毒剂的抵抗力不同，因此在消毒时必须区别对待。
(1) 细菌繁殖体很容易被消毒剂消灭。 一般来说，革兰氏阳性菌对消毒剂比较敏感，而革兰氏阴性菌往往有较强的抵抗力。 繁殖体对热敏感，消毒方法以热消毒为主。
(2)细菌芽孢对消毒因子的抵抗力最强，杀灭细菌芽孢最可靠的方法是加热灭菌、电离辐射和环氧乙烷熏蒸。 化学消毒剂中，戊二醛和过氧乙酸能杀灭芽孢，但可靠性不如热力杀菌。
(3)不同类型病毒对消毒因子的耐受性差异很大，亲水性病毒的耐受性强于亲脂性病毒。
(4)真菌较耐干燥、耐日光、耐紫外线和大部分化学药物，但不耐热(60℃1小时即被杀死)。
2.微生物数量
污染微生物数量越多，消毒时间越长，剂量越大。
3.有机物的存在
①有机物在微生物表面形成一层保护层，阻碍消毒剂与微生物的接触或延缓消毒剂的作用，使微生物逐渐产生对药物的适应性。
②有机物与消毒剂作用形成溶解度比原来低或杀菌作用弱的化合物。
③部分消毒剂与有机物相互作用，微生物浓度降低。
④有机物能中和部分消毒剂。 消毒剂中的重金属和表面活性剂受有机物影响较大，但对戊二醛影响较小。
4.温度
随着温度的升高，杀菌作用增强，但温度变化对各种消毒剂的作用不同。 例如甲醛、戊二醛、环氧乙烷的湿度增加一倍时，杀菌效果可提高10倍。 但酚类和醇类受温度影响较小。
5、PH值
杀菌效果受到两种方式的影响：
①对消毒剂的作用：改变其溶解度和分子结构。
② pH值过高或过低都会影响微生物的生长。
在酸性条件下，细菌表面负电荷减少，阴离子消毒剂具有良好的杀菌效果。 在碱性条件下，细菌表面负电荷增多，有利于阳离子消毒剂发挥作用。
6.治疗剂量和监测
保证消毒灭菌处理剂量，加强效果监测，防止再次污染。
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消毒灭菌方法
（一）物理消毒灭菌法
物理消毒灭菌是利用物理因素杀灭微生物的方法。 包括热力消毒、辐射消毒、空气净化、超声波消毒和微波消毒。
1、热力消毒灭菌 高温可使微生物的蛋白质和酶类变性或凝固（结构改变导致功能丧失），新陈代谢受阻而死亡，从而达到消毒灭菌的目的。 在消毒中，热可分为湿热和干热两大类。
干热灭菌
干热是指相对湿度低于20%的高温。 干热消毒杀菌是靠空气进行的，传热效果比较慢。 一般80-100℃干热1小时可杀死繁殖体，160-170℃2小时可杀死孢子。
(1)燃烧法是一种简单、快速、彻底的灭菌方法，但由于对物品的破坏较大，其应用范围受到限制。
焚烧法：一些耐高温的器械（金属、搪瓷）在急需或无条件时，可采用其他方法进行灭菌。 将仪器放在火焰上并燃烧 1-2 分钟。 如果是搪瓷容器，倒入少量95%的乙醇，慢慢转动容器，使乙醇均匀分布医用灭菌锅价格，点燃燃烧约1-2分钟至熄灭。 采集细菌培养标本时，将试管（瓶）口、盖置于火焰上，在取标本前后（即开盖后、合盖前）烧灼，旋回来回2-3次。
燃烧时要注意安全，远离易燃易爆物品，如氧气、汽油、乙醚等。燃烧过程中切勿加入乙醇医用灭菌锅价格，以免因火焰窜升而引起燃烧或火灾。 锋利的刀具和剪刀用于保护刀片，不应燃烧消毒。
焚烧：一些特殊的感染，如破伤风、气性坏疽、被铜绿假单胞菌感染的敷料，以及其他被污染和未保留的物品，如脏纸、垃圾等，应放入焚化炉中焚烧，使其炭化。
(2)干烤法
电动培养箱：利用培养箱的热风进行杀菌灭菌。 培养箱加热的空气在一定空间内不断对流，产生均匀效果的热空气直接穿透物体。 一般80-100℃干热1小时可杀死繁殖体，160-170℃2小时可杀死孢子和病毒。 热风杀菌法适用于玻璃器皿、瓷器、明胶海绵、液体石蜡、各种粉末等。杀菌后，箱内温度降至50-40℃以下后方可打开柜门，以防炸裂。
微波消毒：微波是一种高频电磁波。 其杀菌原理是热效应，所到之处分子内部产生剧烈运动，使物体内外湿度迅速上升； 另一种是综合效应，如化学效应、电磁共振效应和场力效应。 目前已广泛应用于食品和药品的消毒，也有使用微波对手术器械包和微生物实验室用品进行消毒的报道。 若物品先用1%过氧乙酸或0.5%溴菌灵处理，可起到协同杀菌作用。 照射2分钟后，杀菌率可由98.81%提高到99.98%-99.99%。
微波对人体有害，其热效应会损伤睾丸、眼睛晶状体等，长期接触还会引起神经功能障碍。 使用时可设置不透微波的金属屏障或佩戴专用护目镜等。
湿热消毒
湿热杀菌是利用空气和水蒸气的热传导，传热快，穿透力强。 与干热灭菌相比，湿热灭菌需要的温度更低，时间更短。
(1)煮沸法 将水煮沸至100℃，保持5-10分钟以杀死繁殖体，保持1-3小时以杀死孢子。 碳酸氢钠加到水中浓度为1%-2%时，沸点可达105℃，可增强杀菌作用，还可去污、防锈。 在高原地区气压低、沸点低的情况下，应延长消毒时间（海拔每升高300米，消毒时间延长2分钟）。 这种方法适用于不怕潮湿、不怕高温的搪瓷、金属、玻璃、橡胶制品。
煮沸前冲洗物品，打开轮毂或盖子，将它们全部浸入水中。 大小相同的碗和盆不能重叠，以确保物品的所有侧面都与水接触。 尖锐、细小、易碎物品用纱布包裹，避免撞击或散落。 将玻璃和搪瓷放入冷水或温水中煮沸； 将金属和橡胶放入沸腾后的水中。 水沸腾后开始计时消毒时间。 若中途添加物品，则重新开始计时，消毒后及时取出物品，保持无菌状态。
(2)高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌器安装严密，输入蒸汽不逸出，温度随蒸汽压力的升高而升高。 当压力增加到103-206kPa时，湿度可达121.3-132℃。 高压蒸汽灭菌是利用高压和高热释放的潜热进行灭菌，是目前可靠有效的灭菌方法。 适用于耐高温、高压、不怕潮湿的物品，如敷料、手术器械、药品、细菌培养基等。
潜热是指lg100℃的水蒸气变成lg100℃的水时，放出2255.2J的热量。
高压蒸汽灭菌的关键问题是提供良好的传热条件，最重要的是要使灭菌器内的冷空气顺畅排出。 由于冷空气的导热性差，阻碍了蒸汽与被灭菌物品的接触，还可以降低蒸汽的分压，使其无法达到合适的温度。
便携式高压蒸汽灭菌器：是一个金属圆筒，分上下两层，隔间盛水，有盖子，可以拧紧，加热后产生蒸汽。 锅外有压力表。 当蒸汽压力增加时，温度也相应增加。 灭菌器体积小，可自发产生蒸汽，携带方便。
操作方法如下：灭菌器内加水3000ml； 将待灭菌物品连同桶一起放入灭菌器内； 将盖子上的排气软管插入铝桶内壁的方管中； 盖上盖子，拧紧铸锭螺丝，防止漏气； 锅下加热，打开排气阀，放冷气（一般在水沸腾后10-15分钟左右），关闭排气阀，逐渐加压至103kPa，温度达到121.3℃，并保持一段时间后20分钟，当排气量达到“0”时，慢慢打开盖子。 如果突然打开盖子，大量冷空气进入，蒸汽凝结成水滴，使物品受潮，玻璃容易爆裂。 然后关闭放气开关，当夹层压力达到灭菌所需压力时（约10分钟后），将蒸汽控制阀移至“灭菌”位置，使蒸汽进入柜室，柜室内的冷气和冷凝水可从柜室内的气阱排出。 当柜室内压力升至103-137kPa，温度达到121.3-126.2℃时，开启调压阀，保持压力和温度恒定。 保持30分钟后，将蒸汽控制阀移至“排气”位置。 排气后，将蒸汽控制阀移至“干燥”位置； 到达“0”位置，热风排出后，即可打开柜门取出物品； 关紧进气阀。
卧式高压蒸汽灭菌器：其结构原理与便携式高压蒸汽灭菌器相同，由于体积较大，可一次对大量物品进行灭菌。 操作人员必须经过专业培训，合格后方可上岗。
预真空高压蒸汽灭菌器：在引入蒸汽前有一个预处理阶段，即柜内负压被抽至2.6kPa（约98%的空气被排除），因此预真空高- 压力蒸汽灭菌器具有较低的排气量除该机型提供的灭菌系统、蒸汽输送系统、控制系统、安全系统和仪表监测指示系统外，还增加了负压系统和空气过滤系统。 机器的操作由电脑控制。
紫外线消毒：室温20℃～25℃时，220V 30W紫外线灯下垂直位置1.0m处的253.7nm紫外线辐射强度应为70W/cm2，低于此值应更换. 立方米不应小于1.5W。 紫外线消毒时，应保持无菌室清洁、干燥。 在无人值守的情况下，可采用紫外线消毒，作用时间以30分钟为宜。 当室内湿度为20%或40%，相对湿度大于60%时，应适当延长照射时间。 使用紫外线对物体表面进行消毒时，应将紫外线直接照射到被照射面，照射剂量要足够。 关闭紫外线灯至少30分钟后，人员方可进入工作。
臭氧消毒：在密闭无菌室内使用浓度为20mg/m3的臭氧，在无人值守条件下作用时间为30min。 消毒后进入室内前室内臭氧浓度为0.2mg/m3。
(2)化学试剂消毒
(1)甲醛消毒：按甲醛(40%)10ml/m3、高锰酸钾5g/m3计算用量。 不同情况，用量不同，但比例为2：1。 药容器要大、耐热、耐腐蚀：一般用陶瓷或玻璃容器，因为高锰酸钾和甲醛有腐蚀性，混合后反应剧烈，放出热量。 房间要密闭，这样熏蒸效果才会好。 容器应尽量靠近门，以便操作人员迅速撤离； 先将温水倒入容器中，再加入高锰酸钾，搅拌均匀； 然后加入甲醛； 添加甲醛后立即离开，并密封房间。 注意顺序：将甲醛倒入高锰酸钾溶液中。 消毒时间一般为20-30分钟。 消毒后开门窗通风。
这里说的甲醛是40%的甲醛溶液，也就是福尔马林，一般包装上说的是37%。 缺点：甲醛对人体危害太大，一般不推荐这种方法。
可以考虑用40%的乳酸熏蒸，效果很好。
(2)乳酸复蒸消毒：室内温度22℃，湿度75%-90%，用0.6g/m3乳酸，分摊9.6g乳酸进行室内熏蒸，使蒸汽扩散整个房间，门窗密闭1小时。
附表：三种常用消毒方式结果对比
注：Ⅰ乳酸熏蒸法； Ⅱ紫外线杀菌法； Ⅲ臭氧消毒法。
结果经方差分析，乳酸熏蒸、臭氧消毒和紫外线消毒比较差异有统计学意义（P<0.05），而乳酸熏蒸和臭氧消毒比较无显着差异（P>0.05）。
（本文转载出于传播有用知识之目的，感谢作者）
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